超声波处理机 DH94-II是一种利用强超声在液体中产生空化效应,对物质进行超声处理的多功能、多用途的仪器,能用于多种动植物细胞、病毒细胞的破碎,同时可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡、清洗及加速化学反应等等。被广泛应用于生物化学、微生物学、药物化学、表面化学、物理学、动物学等领域。
用途:
※用于动植物细胞、细菌、芽孢或组织的粉碎,从细胞中提取蛋白质以及进行病毒、疫苗的科学培养实验。
※加速化学、物理学等的反应速度和加速液体脱气。
※原油稀释、油水乳化、加速脱晶,玻璃均浆等进行的科研分析。
※分散稀土,各类无机矿物质,以及配制近纳米百分之一的乳胶体均化混合物等。
※模具微孔,盲孔的快速强力高精洗液。
实验目的
1、了解超声细胞破碎的基本原理
2、掌握超声细胞破碎的基本技术
实验原理
强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关,空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。
材料和试剂
细菌10ml、烧杯、刨冰、75%酒精棉球
型号 | DH94-II |
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频率 | 19.5-20.5KHz |
功率 | 400W |
随机变幅杆 | Φ6 |
可选配变幅杆 | Φ2、3、6 |
破碎容量 | 0.5-400ml |
占空比 | 1-99% |
电源 | 220/110V 50Hz/60Hz |
电源机箱尺寸 | 400*280*220mm |
净重 | 12.1kg |
主机+换能器重量 | 14.5kg |
外包装尺寸 | 534*295*435mm |
探头型号大小 | 破碎细胞容量 |
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2mm | 150ul-5ml |
3mm | 200ul-10ml |
6mm | 10ml-50ml |
10mm | 50ml-150ml |
超声波发生器 | 一台 |
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振动系统(换能器组件) | 一只 |
隔音箱 | 一台 |
十字夹(在隔音箱内) | 一只 |
试管夹(在隔音箱内) | 一只 |
电源线 | 一根 |
专用扳手(用于拆卸变幅杆) | 一套 |
保险丝 8A 、5A | 各2个 |
使用说明书 | 一份 |
合格证 | 一张 |
保修卡 | 一份 |
细胞破碎的方法:
一、机械破碎法:是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器 等将细胞破碎开来 。
1. 高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。
2. 玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。
二、物理破碎法:指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。
1:用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器)。
机制:可能与强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关,空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。
超声波破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。(使用时注意降温,防止过热)。
2. 高压破碎:细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。
这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。
3. 反复冻融法:将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。
三、化学破碎法:指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜,使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变 。
有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。浓度一般为1mg/ml。
四、酶学破碎法 :选用合适的酶,使细胞壁遭到破坏,进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来 。
细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好。
裂解液标准配方: :50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 。
综合叙述:无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且应该在破碎的同时多加几次;另外,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取。
使用前注意事项:
1.根据所处理的样本体积选择适当探头,使用前后均须用酒精棉球擦洗探头,换探头须刚专用扳手更换;
2.AMPLITUDE旋钮打开时,探头不得在空气中暴露,特殊情况下(测试探头)不应超过10秒;
3.使用前准备好冰盒,样品处理时必须置于冰浴中,样品浓度不可过大。
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